జర్నల్ ఆఫ్ స్టెమ్ సెల్ రీసెర్చ్ & థెరపీ

నైరూప్య

పిండ మూల కణాలలో ప్రత్యామ్నాయ ప్రమోటర్లచే మానవ నానోగ్ యొక్క లిప్యంతరీకరణ నియంత్రణ

సత్యబ్రత దాస్, స్నేహలత జెనా, యున్-మి కిమ్, నికోలస్ జవాజావా మరియు డానా ఎన్. లెవాస్యూర్

పరిచయం : సెల్ థెరపీ కోసం ఉపయోగించే ప్లూరిపోటెంట్ మూలకణాల సంభావ్యత అపరిమిత స్వీయ-పునరుద్ధరణకు లోనవుతున్నప్పుడు అన్ని సూక్ష్మక్రిమి పొరల కణాలను పేర్కొనే వారి ప్రత్యేక సామర్థ్యం అంతర్లీనంగా ఉండే పరమాణు విధానాల యొక్క సమగ్ర అవగాహనపై ఆధారపడి ఉంటుంది. ప్రత్యామ్నాయ స్ప్లికింగ్ మరియు ప్రత్యామ్నాయ ప్రమోటర్ ఎంపిక ఒకే జన్యు లోకస్ నుండి ఉత్పత్తి చేయబడిన ట్రాన్‌స్క్రిప్ట్‌ల సంఖ్యను పెంచడం ద్వారా ఈ యంత్రాంగానికి దోహదపడతాయి మరియు తద్వారా వాటి జీవసంబంధమైన పాత్రలో తేడా ఉండే నవల ప్రోటీన్ వేరియంట్‌ల వ్యక్తీకరణను ప్రారంభిస్తుంది. హోమియోడొమైన్-కలిగిన ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్ కారకం NANOG ఎంబ్రియోనిక్ స్టెమ్ సెల్స్ (ESC) యొక్క ప్లూరిపోటెన్సీని నిర్వహించడంలో కీలక పాత్ర పోషిస్తుంది. కాబట్టి, ESC లలో NANOG లోకస్ యొక్క ట్రాన్స్‌క్రిప్షనల్ రెగ్యులేషన్ గురించి పూర్తి అవగాహన అవసరం.

పద్ధతులు: హై-త్రూపుట్ సీక్వెన్సింగ్ మెథడాలజీలను ఉపయోగించి పొందిన డేటా నుండి మానవ పిండ మూలకణాలలో NANOG కోసం రెగ్యులేటరీ ఫుట్‌ప్రింట్‌లు మరియు ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్ స్థాయిలు గుర్తించబడ్డాయి. RNA సంగ్రహించబడిన మానవ ESCల యొక్క రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్ తరువాత పరిమాణాత్మక నిజ-సమయ PCR ఉల్లేఖన NANOG ట్రాన్స్‌క్రిప్షనల్ ప్రారంభం యొక్క అప్‌స్ట్రీమ్‌లో విస్తరించి ఉన్న ప్రాంతం నుండి ట్రాన్స్‌క్రిప్ట్‌ల వ్యక్తీకరణను ధృవీకరించడానికి ఉపయోగించబడింది. ప్రమోటర్ రిపోర్టర్ మరియు ఎలెక్ట్రోఫోరేటిక్ మొబిలిటీ షిఫ్ట్ అస్సేస్ ఉపయోగించి ప్రమోటర్ ఐడెంటిఫికేషన్ మరియు క్యారెక్టరైజేషన్ జరిగింది.

ఫలితాలు:
NANOGలో తెలిసిన ట్రాన్స్‌క్రిప్షనల్ స్టార్ట్ సైట్‌కి ఎగువన ఉన్న ప్రాంతంలో ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్ యాక్టివ్ క్రోమాటిన్ మార్కింగ్ మరియు ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్ ఫ్యాక్టర్ బైండింగ్ సైట్ ఎన్‌రిచ్‌మెంట్ గమనించబడ్డాయి. ఈ లిప్యంతరీకరణ క్రియాశీల ప్రాంతం నుండి నవల ట్రాన్స్క్రిప్ట్స్ యొక్క వ్యక్తీకరణ మానవ ESCలలో NANOG ప్రత్యామ్నాయ స్ప్లికింగ్ ఉనికిని నిర్ధారించింది. మేము ఈ అప్‌స్ట్రీమ్ ప్రాంతంలో గణనీయమైన బలాన్ని కలిగి ఉన్న ప్రత్యామ్నాయ NANOG ప్రమోటర్‌ని గుర్తించాము. NANOG దాని ప్రాక్సిమల్ డౌన్‌స్ట్రీమ్ ప్రమోటర్‌కు కట్టుబడి దాని వ్యక్తీకరణను స్వయంచాలకంగా నియంత్రిస్తుందని కూడా మేము కనుగొన్నాము.

ముగింపు: మా అధ్యయనం మానవ ESCలలో NANOG నుండి నవల ట్రాన్స్క్రిప్ట్ వ్యక్తీకరణను వెల్లడిస్తుంది,
ప్రత్యామ్నాయ స్ప్లికింగ్ NANOG లోకస్ నుండి ఉద్భవించే ట్రాన్స్‌క్రిప్ట్‌ల వైవిధ్యాన్ని పెంచుతుందని మరియు ఈ ట్రాన్స్‌క్రిప్ట్‌లు ప్రత్యామ్నాయ ప్రమోటర్ ద్వారా వ్యక్తీకరించబడతాయని సూచిస్తుంది. ప్రత్యామ్నాయ స్ప్లికింగ్ మరియు ప్రత్యామ్నాయ ప్రమోటర్ వినియోగం NANOGని నియంత్రించడానికి సహకరిస్తుంది, ESCల నిర్వహణలో దాని పనితీరును అనుమతిస్తుంది.