బయోకెమిస్ట్రీ & అనలిటికల్ బయోకెమిస్ట్రీ

నైరూప్య

మైటోకాండ్రియాలో ROS ఉత్పత్తిపై కాల్షియం యొక్క ప్రభావాలను పర్యవేక్షించడానికి డైక్లోరోఫ్లోరోసెసిన్‌ను ప్రోబ్‌గా ఉపయోగించడం

ఓల్గా వి అకోపోవా, లియుడ్మిలా కోల్చిన్స్కాయ మరియు వాలెంటినా నోసర్

కణాలు మరియు వివిక్త మైటోకాండ్రియాలో రియాక్టివ్ ఆక్సిజన్ జాతుల (ROS) ఉత్పత్తిని పర్యవేక్షించడానికి డైక్లోరోఫ్లోరోసెసిన్ (DCF) విస్తృతంగా వర్తించబడుతుంది. వివిక్త మైటోకాండ్రియాలో Ca2+ రవాణాతో పాటుగా ROS ఏర్పాటును పర్యవేక్షించడం కోసం DCF వినియోగానికి సంబంధించిన విభిన్న విధానాలను పోల్చడం మా ఉద్దేశ్యం. ROS ఉత్పత్తిపై Ca2+ ప్రభావాలు DCF అప్లికేషన్ యొక్క రెండు రీతులను ఉపయోగించి ఎలుక మెదడు మరియు కాలేయ మైటోకాండ్రియాలో అధ్యయనం చేయబడ్డాయి: మొదటిది DCF పూర్వగామి డైక్లోరోఫ్లోరోసెసిన్ డయాసిటేట్ (DCFDA)తో స్టాక్ మైటోకాన్డ్రియల్ సస్పెన్షన్‌ను ప్రీలోడింగ్ చేయడం మరియు మరొకటి నేరుగా DCFDA యొక్క ఆల్కాట్‌లను జోడించడం. పొదిగే మాధ్యమం. కాల్షియం మెదడు మరియు కాలేయ మైటోకాండ్రియాలో ROS ఉత్పత్తిని పెంచింది, సైటోక్రోమ్ సి క్రమంగా విడుదల చేయడం మరియు ఎలక్ట్రాన్ ప్రవాహం యొక్క గేటింగ్ కారణంగా స్థిరమైన మరియు సమతుల్యత లేని పరిస్థితుల్లో. DCF-ప్రీలోడెడ్ మైటోకాండ్రియాను ఉపయోగించి, స్థిరమైన స్థితిలో ROS ఏర్పడే రేటు Ca2+-సైక్లింగ్ మరియు Ca2+-ప్రేరేపిత శ్వాసక్రియ రేటుపై సరళంగా ఆధారపడి ఉంటుందని మేము చూపించాము. సమతౌల్య స్థితికి పరివర్తన ఫలితంగా ROS నిర్మాణంలో నాన్-లీనియర్ పెరుగుదల ఏర్పడింది, ఇది కూడా Ca2+ ఏకాగ్రతపై ఆధారపడటాన్ని ప్రదర్శించింది. DCF-ప్రీలోడెడ్ మైటోకాండ్రియాలో DCF ఫ్లోరోసెన్స్ Ca2+ రవాణా యొక్క సమయ కోర్సును దగ్గరగా అనుసరించింది, అన్‌లోడ్ చేయబడిన మైటోకాండ్రియా ప్రోబ్ లోడింగ్‌లో DCF ఏకాగ్రత మాతృక ప్రదేశంలోకి మారుతూ ఉండటం వలన ROS ఏర్పడటాన్ని గుర్తించడంలో జోక్యం చేసుకుంది. ప్రయోగాల ఆధారంగా, మైటోకాండ్రియాలో ముందుగా లోడ్ చేయబడిన DCF ROS ఉత్పత్తిపై Ca2+ రవాణా యొక్క ప్రభావాలను పర్యవేక్షించడానికి తగిన ప్రోబ్‌ను అందించగలదని మేము నిర్ధారణకు వచ్చాము.