జర్నల్ ఆఫ్ స్టెమ్ సెల్ రీసెర్చ్ & థెరపీ

నైరూప్య

ఫాబ్రీ డిసీజ్ మౌస్ మోడల్ నుండి ప్లూరిపోటెంట్ స్టెమ్ సెల్స్ విజయవంతమైన ఇండక్షన్: సేఫ్ లెంటివైరల్ జీన్ థెరపీ అభివృద్ధి వైపు

మకోటో యోషిమిట్సు, కోజి హిగుచి, నవోమిచి అరిమా, జెఫ్రీ ఎ మెడిన్ మరియు తోషిహిరో టకెనకా

ప్రేరేపిత ప్లూరిపోటెంట్ స్టెమ్ (iPS) కణాలు ఇప్పుడు ఆటోలోగస్ ట్రాన్స్‌ప్లాంటేషన్ ద్వారా సెల్ మరమ్మత్తు కోసం విలువైన సాధనంగా గుర్తించబడ్డాయి. ఈ కణాలు అక్టోబర్-3/4, Klf4 మరియు Sox2 యొక్క ట్రాన్స్‌క్రిప్షనల్ కారకాల ఇండక్షన్ ద్వారా సోమాటిక్ కణాల నుండి పొందవచ్చు. ఈ అధ్యయనంలో, మేము α-గెలాక్టోసిడేస్ A-నాకౌట్ మౌస్ యొక్క టెయిల్-టిప్ ఫైబ్రోబ్లాస్ట్‌ల నుండి iPS కణాలను విజయవంతంగా స్థాపించాము, ఇది ప్రసిద్ధ ఫాబ్రీ వ్యాధి మౌస్ మోడల్. ఈ Fabry-iPS కణాలు SSEA-1 యొక్క వ్యక్తీకరణ, పెరిగిన ఆల్కలీన్ ఫాస్ఫేటేస్ కార్యకలాపాలు, రెట్రోవైరల్-ట్రాన్స్‌జీన్‌ని నిశ్శబ్దం చేయడం మరియు పిండ శరీరం (EB) ఏర్పడటం ద్వారా వర్ణించబడిన ఎంబ్రియోనిక్ స్టెమ్ (ES) సెల్ ఫినోటైప్‌ను ప్రదర్శించాయి. ఫాబ్రీ-ఐపిఎస్ కణాలను నగ్న ఎలుకలలోకి సబ్కటానియస్ టీకాలు వేయడం వల్ల టెరాటోమా ఏర్పడింది. 6వ రోజు, డిఫరెన్సియేషన్ మీడియాలో EBలు హెమటోపోయిటిక్ వంశ-నిర్దిష్ట జన్యు వ్యక్తీకరణను చూపించాయి. అదనంగా, మేము 5-7 రోజుల పాటు OP9 స్ట్రోమా కణాలపై కల్చర్ చేయబడిన EB ల యొక్క ఆకస్మిక సంకోచాన్ని గమనించాము. RT-PCR వివిధ కార్డియాక్ మార్కర్ జన్యువులు, Nkx2.5, Gata4, Tnnt2 (కార్డియాక్ ట్రోపోనిన్ T), మరియు Mlc2a వంటివి కంట్రోల్ ఫీడర్ కణాల కంటే ఫ్యాబ్రీ iPS కణాల భేదాత్మక సంస్కృతులలో ఎక్కువగా వ్యక్తీకరించబడుతున్నాయని నిరూపించాయి. జన్యు చికిత్స కోసం వాటి సంభావ్య ఉపయోగాన్ని అంచనా వేయడానికి, ఫాబ్రీ వ్యాధికి చికిత్సా జన్యువు అయిన α- గెలాక్టోసిడేస్-A cDNAతో ఫ్యాబ్రీ-iPS కణాల లెంటివైరల్ ట్రాన్స్‌డక్షన్ నిర్వహించబడింది. ఈ ట్రాన్స్‌డక్షన్ ఫలితంగా కణాంతర మరియు స్రవించే α- గెలాక్టోసిడేస్ A కార్యాచరణ పెరిగింది. ట్రాన్స్‌డక్షన్ తర్వాత 30 రోజులకు పైగా లెంటివైరల్ థెరప్యూటిక్ జన్యు బదిలీ ద్వారా ES సెల్-నిర్దిష్ట జన్యు వ్యక్తీకరణ ప్రొఫైల్ మారలేదు. ఈ పరిశోధనలు ఫాబ్రీ-ఐపిఎస్ కణాలు తక్షణమే పొందగలవని మరియు జన్యు చికిత్సలో ఉపయోగించడానికి అనుకూలంగా ఉన్నాయని నిరూపిస్తున్నాయి.