జీన్ టెక్నాలజీ

నైరూప్య

5ʹ అనువదించని మరియు అనువదించబడిన ప్రాంతాన్ని మార్చడం ద్వారా E. కోలిలో రీకాంబినెంట్ హ్యూమన్ ప్రోఇన్సులిన్ వ్యక్తీకరణ

అస్లాం ఎఫ్, లతీఫ్ కె, వసీమ్ ఆర్, నాజ్ ఎస్ మరియు ఇఫ్తికార్ ఎస్

RNAను బదిలీ చేయడానికి DNA కోడ్‌ని బదిలీ చేయడం ద్వారా Messenger RNA అనువాద ప్రక్రియను ప్రారంభిస్తుంది. షైన్-డాల్గార్నో సీక్వెన్స్ అని పిలువబడే పాలీ ప్యూరిన్ రిచ్ సీక్వెన్స్ ప్రారంభ కోడాన్ యొక్క స్థానాన్ని నిర్ణయించడంలో సహాయపడుతుంది, షైన్-డాల్గార్నో సీక్వెన్స్ భిన్నంగా ఉంటుంది ఎందుకంటే ఇది రైబోజోమ్‌ను mRNAపై అంతర్గత స్థానంలో ఈ క్రమానికి నేరుగా బంధించడం ద్వారా నిర్మించడానికి అనుమతిస్తుంది. mRNA సెకండరీ స్ట్రక్చర్‌ను బైండ్ చేయడానికి, RBS మధ్య దూరం మరియు జన్యువు యొక్క కోడాన్ ఎఫెక్ట్స్ ట్రాన్సేషనల్ ఎఫెక్సీని ప్రారంభించడానికి అనువాద దీక్షా సైట్ యొక్క 5'ఎండ్‌లోని రైబోసోమల్ బైండింగ్ సైట్. ఈ అధ్యయనంలో మేము రైబోజోమ్ బైండింగ్ సైట్ మధ్య దూరాన్ని మారుస్తాము మరియు అనువాద వ్యక్తీకరణ యొక్క విభిన్న నిష్పత్తులను పొందడానికి కోడాన్‌ను ప్రారంభిస్తాము. ఈ ప్రయోజనం కోసం, pET21a వెక్టర్‌లో క్లోన్ చేయబడిన ప్రోఇన్సులిన్ జన్యువు, బైండింగ్ సైట్ మరియు స్టార్టింగ్ కోడాన్ మధ్య దూరం 8 న్యూక్లియోటైడ్‌ల వరకు ఉంచబడింది. రైబోజోమ్ బైండింగ్ సైట్ (RBS) మరియు స్టార్ట్ కోడాన్ మధ్య ఈ దూరం వద్ద, ప్రొఇన్సులిన్ యొక్క వ్యక్తీకరణ మొత్తం సెల్యులార్ ప్రోటీన్లలో 30%. మధ్య 10 న్యూక్లియోటైడ్‌లు ఉన్నప్పుడు, వ్యక్తీకరణ 2-4% వరకు తగ్గుతుంది. RBS మరియు స్టార్ట్ కోడాన్ మధ్య 12 న్యూక్లియోటైడ్‌లతో, వ్యక్తీకరణ మరింత 1-2% వరకు తగ్గింది. ఈ ప్రయత్నాలు యాదృచ్ఛికంగా చేయబడినందున, M-రెట్లు ద్వారా mRNA ద్వితీయ నిర్మాణాలను తనిఖీ చేయడం ద్వారా రైబోజోమ్ బైండింగ్ సైట్ మరియు ప్రోఇన్సులిన్ జన్యువు ప్రారంభం మధ్య బంధాన్ని చూపించింది. mRNA యొక్క ద్వితీయ నిర్మాణాన్ని తక్కువ స్థిరంగా (ΔG=-5.5) చేయడానికి ప్రోఇన్సులిన్ జన్యువు ప్రారంభంలో పది వేర్వేరు న్యూక్లియోటైడ్‌లను చేర్చడం ద్వారా మరొక ప్రయత్నం జరిగింది, ఇది BL21 కోడాన్ ప్లస్ కణాలలో ప్రోఇన్సులిన్ యొక్క వ్యక్తీకరణను గణనీయంగా మార్చదు. ప్రోటీన్ వ్యక్తీకరణ యొక్క ఇతర నియంత్రణ కారకాలు ఉన్నాయి అంటే, జీవక్రియ అస్థిరత, mRNA యొక్క వేగవంతమైన క్షీణత లేదా ప్రోటీన్ చేరడం mRNA యొక్క వ్యక్తీకరణను తగ్గించవచ్చు.