బయోకెమిస్ట్రీ & అనలిటికల్ బయోకెమిస్ట్రీ

నైరూప్య

చవకైన ఫ్లోరోసెంట్ ఆప్టికల్ బ్రైటెనర్‌ని ఉపయోగించి వన్-డైమెన్షనల్ పాలియాక్రిలమైడ్ జెల్ ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్‌పై ప్రోటీన్‌లను వేగంగా గుర్తించడం

శశిధర్ RB, తనుజా కోసూరి మరియు సుజాత నాయక్

కమర్షియల్ ఫాబ్రిక్ ఫ్లోరోసెంట్ ఆప్టికల్ బ్రైటెనర్ రాణిపాల్ ^® (F-OB), స్థానిక మరియు SDS -1D-PAGEలో ప్రోటీన్‌లను స్టెయిన్ చేయడానికి విజయవంతంగా ఉపయోగించబడింది . డైక్లోరోమీథేన్ మరియు నీటి యొక్క బైఫాసిక్ ద్రావణి వ్యవస్థను ఉపయోగించడం ద్వారా F-OB శుద్ధి చేయబడింది. శుద్ధి చేయబడిన మరియు ముడి F-OB యొక్క R _f విలువ (0.63) TLCలో పోల్చదగినది. శుద్ధి చేయబడిన F-OB యొక్క మాస్ స్పెక్ట్రోమెట్రీ 414 (m/z) వద్ద బేస్ పీక్‌ని సూచించింది. F-OB యొక్క శోషణ మరియు ఉద్గార గరిష్టం వరుసగా 350 nm మరియు 430 nm గా కనుగొనబడ్డాయి. F-OB స్థానిక జెల్‌పై ప్రీ- మరియు పోస్ట్-ఎలెక్ట్రోఫోరేటిక్ రన్ రెండింటిలోనూ ప్రోటీన్‌లను మరక చేస్తుంది. పోస్ట్‌ఎలెక్ట్రోఫోరేటిక్ స్టెయినింగ్ వేగవంతమైనది మరియు తడిసిన ప్రోటీన్‌లను దృశ్యమానం చేయడానికి 20 నిమిషాలు అవసరం. మరోవైపు, SDS జెల్‌లలో, ప్రోటీన్‌లను F-OBతో మరక చేయడానికి ముందు SDS వెలికితీత కోసం అదనంగా 20 నిమిషాలు అవసరం. SDS F-OBని ప్రోటీన్‌లకు బంధించడంలో జోక్యం చేసుకుంటుందని కనుగొనబడింది. మాలిక్యులర్ వెయిట్ మార్కర్ల యొక్క వివిధ సాంద్రతలు లోడ్ చేయబడ్డాయి మరియు వాటి ఫ్లోరోసెంట్ తీవ్రత ప్రోటీన్ల సాంద్రతకు వ్యతిరేకంగా రూపొందించబడింది. r ² విలువలు 0.965 నుండి 0.997 వరకు ఉన్నాయి, ఇది అద్భుతమైన రేఖీయతను సూచిస్తుంది. కార్బోనిక్ అన్‌హైడ్రేస్‌ని గుర్తించడం 8.0-800 ng పరిధిలో ఉంది. ప్రోటీన్ స్టెయినింగ్ కోసం ఉపయోగించే చాలా రంగుల మాదిరిగా కాకుండా, F-OBతో స్టెయినింగ్ ట్యాంక్ బఫర్‌లో (2 mg/100 mL) నిర్వహించబడుతుంది మరియు తిరిగి మార్చబడుతుంది. F-OB, బహుశా ప్రొటీన్‌లను (US $ 0.04/25.0 గ్రా) మరక చేయడానికి అత్యంత ఖర్చుతో కూడుకున్న ఫ్లోరోసెంట్ డై కావచ్చు. F-OB అనేది పాలియాక్రిలమైడ్ జెల్‌లపై ప్రోటీన్‌లను మరక చేయడానికి ప్రత్యామ్నాయంగా సరళమైనది, సురక్షితమైనది, సున్నితమైనది, తక్కువ సమయం తీసుకునేది మరియు ఆర్థికపరమైన ఫ్లోరోసెంట్ డై అని కనుగొనబడింది.