బయోకెమిస్ట్రీ & అనలిటికల్ బయోకెమిస్ట్రీ

నైరూప్య

ఓరల్ పాథోజెనిక్ ఆర్గానిజం పోర్ఫిరోమోనాస్ గింగివాలిస్ నుండి మెథియోనిన్ గామా లైస్-డీమినేస్ (Mgld) యొక్క శుద్ధీకరణ మరియు లక్షణం

డేవిడ్ మోర్కోస్1, బ్రాడ్ జె ష్మియర్, అరుణ్ మల్హోత్రా మరియు వెంకటాచలం కెవి 

పోర్ఫిరోమోనాస్ గింగివాలిస్ అనేది నోటి ద్వారా వచ్చే వ్యాధికారక బాక్టీరియం, ఇది మానవులలో హాలిటోసిస్ (దుర్వాసన) మరియు పీరియాంటైటిస్‌కు కారణమవుతుంది. మెథియోనిన్ గామా లైస్-డీమినేస్ (Mgld) ద్వారా మెథియోనిన్ క్షీణత నుండి ఉత్పన్నమయ్యే మిథైల్థియోల్ వంటి అస్థిర సల్ఫర్ సమ్మేళనాల కారణంగా హాలిటోసిస్ వ్యక్తమవుతుంది. ఈ నివేదికలో, మేము బ్యాక్టీరియా వ్యక్తీకరణ వ్యవస్థను ఉపయోగించి పోర్ఫిరోమోనాస్ గింగివాలిస్ mgldని క్లోన్ చేసాము మరియు వ్యక్తీకరించాము మరియు శుద్ధి చేయబడిన హోమోటెట్రామెరిక్ ఎంజైమ్ L-[1-14C]-మెథియోనిన్‌ను సబ్‌స్ట్రేట్‌గా ఉపయోగించి ఒక నవల ఐసోటోప్ అస్సే ద్వారా వర్గీకరించబడింది. Mgld అనేది PLP-ఆధారిత L-మెథియోనిన్ CS లైసెడెమినేస్, ఇది L-మెథియోనిన్ యొక్క గామా-కార్బన్-సల్ఫర్ బంధాన్ని మిథైల్థియోల్‌కు విడదీస్తుంది మరియు డీమినేటెడ్ మొత్తం ఉత్పత్తి α-ketobutyrateను ఏర్పరుస్తుంది. ఎక్సోజనస్ 3H-L-2-aminobutyrate ఎంజైమ్ అదనపు పరిస్థితులలో 3H-α-ketobutyrate లోకి డీమినేట్ చేయబడదని మేము కనుగొన్నాము, L-మెథియోనిన్ క్యాటాబోలిజం సమయంలో బౌండ్ ఇంటర్మీడియట్(ల) యొక్క సమర్థవంతమైన బదిలీకి మద్దతు ఇస్తుంది. L-మెథియోనిన్ నుండి α-ketobutyrate ఏర్పడటానికి మొత్తం ప్రతిచర్య Km 1.0 mM, Vmax 5.27 μmol min-1 mg-1 మరియు మోనోమెరిక్ kcat/Km 3729.3 M-1 s-1ని ప్రదర్శిస్తుంది. Mgld pH 8 కంటే ఎక్కువ మరియు 37°-50°C ఉష్ణోగ్రత పరిధిలో సరైన కార్యాచరణను ప్రదర్శిస్తుంది. Mgld నిరోధం కోసం అనేక సమ్మేళనాలు పరీక్షించబడ్డాయి. సహజ ఉత్పత్తి DL-Propargylglycine అత్యంత ప్రభావవంతమైన Mgld నిరోధకంగా నిలుస్తుంది మరియు అందువలన హాలిటోసిస్ నియంత్రణకు ఉపయోగపడుతుంది. Mgldకి N-formylmethionineపై దాదాపు ఎటువంటి కార్యాచరణ లేదు, ఎంజైమ్‌తో స్కిఫ్ బేస్‌ను ఏర్పరచడానికి సబ్‌స్ట్రేట్‌పై ఉచిత α-అమినో-నత్రజని అవసరాన్ని నిర్ధారిస్తుంది.