జీన్ టెక్నాలజీ

నైరూప్య

అజురిన్ యొక్క పరమాణు గుర్తింపు మరియు వ్యక్తీకరణ: సూడోమోనాస్ జాతుల స్థానిక ఐసోలేట్ల నుండి క్యాన్సర్ నిరోధక ప్రోటీన్

అస్లాం ఎఫ్, ఫరూక్ ఎ, ఖైజర్ హెచ్, బజ్వా ఎస్, సలీమ్ ఎఫ్ మరియు నాజ్ ఎస్

అజురిన్ 2000లో యాంటీకాన్సర్ డ్రగ్‌గా గుర్తించబడింది, ఇది అపోప్టోసిస్ మరియు సైటోటాక్సిసిటీని ప్రేరేపించడంలో ముఖ్యమైన పాత్ర పోషిస్తుంది. కణితి కణాలలోకి చొచ్చుకుపోయిన తర్వాత అజురిన్ సైటోసోల్ మరియు న్యూక్లియర్ మెటీరియల్‌తో కలిసిపోతుంది మరియు సెల్ లోపల దాని స్థాయిని పెంచడానికి దోహదపడే p53 (కణితిని అణిచివేసే ప్రోటీన్)ని స్థిరీకరించవచ్చు. సూడోమోనాస్ ఎరుగినోసా నుండి అజురిన్ యొక్క 447 bp PCR విస్తరించిన భాగం pTG19-T క్లోనింగ్ వెక్టర్‌లో క్లోన్ చేయబడింది. DNA క్రమం 19 అమైనో ఆమ్లాల సిగ్నల్ పెప్టైడ్‌తో పాటు 128-అమినోయాసిడ్ మెచ్యూర్ అజురిన్ ప్రోటీన్‌తో ప్రీ-ప్రోటీన్‌ను అంచనా వేస్తుంది. అజురిన్ జన్యువు pET22b వెక్టర్‌లో క్లోన్ చేయబడింది. రీకాంబినెంట్ rpET22b (+)-Azu వెక్టర్ BL21-కోడాన్ ప్లస్ (DE3) సెల్‌లలో క్లోన్ చేయబడింది. ఆప్టిమైజ్ చేయబడిన, అజురిన్ జన్యువు యొక్క అధిక వ్యక్తీకరణ IPTG యొక్క 0.5 mM సాంద్రత వద్ద 6 గంటల తర్వాత 37 ° C వద్ద పొందబడింది. సీక్వెన్సింగ్ నివేదించబడిన అజురిన్ సీక్వెన్స్‌తో 99.8% సీక్వెన్స్ హోమోలజీని చూపుతుంది. ఒక నిశ్శబ్ద మ్యుటేషన్ అంటే, CCA నుండి CCG వరకు 17వ అమైనో ఆమ్లం వద్ద కనుగొనబడింది. అయినప్పటికీ, ఫలితంగా అమైనో ఆమ్లం (ప్రోలిన్) అలాగే ఉంటుంది.