క్లినికల్ & మెడికల్ బయోకెమిస్ట్రీ

నైరూప్య

చెదురుమదురు రొమ్ము క్యాన్సర్‌లో RASSF1 జీన్ మిథైలేషన్ మరియు mRNA వ్యక్తీకరణ యొక్క పరమాణు విశ్లేషణ

మరియా లాగియో, నికోలెటా పౌంపౌరిడౌ, నికోలాస్ గౌటాస్, డిమిట్రియోస్ వ్లాచోడిమిట్రోపౌలోస్, అగెలికి పప్పా, ఎవి లియానిడౌ, ట్రియాంటఫిలోస్ లిలోగ్లౌ మరియు క్రిస్టోస్ క్రౌపిస్

పరిచయం: ఈ అధ్యయనం యొక్క లక్ష్యం RASSF1 జన్యువు యొక్క మొదటి ప్రమోటర్ యొక్క DNA మిథైలేషన్ (రొమ్ము కణజాలంలో దాని ప్రాథమిక ట్రాన్స్క్రిప్ట్ RASSF1A ఎక్కడ నుండి లిప్యంతరీకరించబడింది), దాని mRNA వ్యక్తీకరణ మరియు చెదురుమదురు రొమ్ము క్యాన్సర్‌లో వాటి మూల్యాంకనం యొక్క DNA మిథైలేషన్‌ను అధ్యయనం చేయడానికి వినూత్న మరియు నమ్మదగిన పద్ధతులను ధృవీకరించడం. పదార్థాలు మరియు పద్ధతులు: తెలిసిన హిస్టోపాథలాజికల్ డేటాతో పాటు 4 సాధారణ రొమ్ము కణజాలాలతో 81 స్తంభింపచేసిన రొమ్ము క్యాన్సర్ కణజాలాల నుండి DNA మరియు RNA విశ్లేషించబడ్డాయి. మొదటి RASSF1 ప్రమోటర్ యొక్క CpG ద్వీపంలో 9 CpG డైన్యూక్లియోటైడ్‌లను విశ్లేషించడం ద్వారా DNA మిథైలేషన్ స్థాయిలు పైరోక్సెన్సింగ్ ద్వారా అంచనా వేయబడ్డాయి. mRNA వ్యక్తీకరణ కోసం, SYBR గ్రీన్ PCR కిట్ మరియు అన్ని RASSF1 ట్రాన్స్‌క్రిప్ట్ వేరియంట్‌లకు (G మినహా) తగిన ప్రామాణికమైన ప్రైమర్‌ల (కియాగెన్) సెట్‌తో రియల్-టైమ్ RT-qPCR పద్ధతి ఉపయోగించబడింది మరియు సింథటిక్ ప్రమాణాలతో ధృవీకరించబడింది. RASSF1 వ్యక్తీకరణ యొక్క సాపేక్ష పరిమాణీకరణ కోసం, 2-ΔCt పద్ధతి బీటా2-మైక్రోగ్లోబులిన్‌తో సూచన జన్యువుగా ఉపయోగించబడింది. ఫలితాలు: 59 నమూనాలు RASSF1 సాధారణంగా-మిథైలేటెడ్ (72.8%), అయితే 22 నమూనాలు హైపర్‌మీథైలేటెడ్ (27.2%)గా వర్గీకరించబడ్డాయి. అలాగే, 40 నమూనాలు RASSF1 mRNA ఓవర్-ఎక్స్‌ప్రెస్సింగ్ (49.4%), అయితే 41 (50.6%) సబ్-ఎక్స్‌ప్రెస్సింగ్‌గా వర్గీకరించబడ్డాయి. మిథైలేషన్ మరియు RASSF1 వ్యక్తీకరణ (p=0.207) మధ్య విలోమ సహసంబంధం కనుగొనబడలేదు. లాజిస్టిక్ రిగ్రెషన్ ప్రతికూల ER గ్రాహకాలు (p=0.008, OR 0.09, CI 0.14-0.52), మిథైలేషన్ శాతం (p=0.006, OR 7.96, CI 1.86) -3 4.86) ఉండటం వల్ల శోషరస కణుపు చొరబాటు సంభావ్యత పెరిగింది. మరియు RASSF1 వ్యక్తీకరణ స్థాయి (p=0.047, OR 3.94, CI 1.02-15.29). మెటాస్టాసిస్ మరియు mRNA RASSF1 ఓవర్-ఎక్స్‌ప్రెషన్ (లాగ్ ర్యాంక్ టెస్ట్, p=0.040) మధ్య ఒక ఉపాంత గణాంకపరంగా ముఖ్యమైన సహసంబంధం ఉందని సర్వైవల్ విశ్లేషణ చూపించింది. తీర్మానాలు: మూల్యాంకనం చేయబడిన పరీక్షలు రొమ్ము కార్సినోమా యొక్క క్లినికల్ మేనేజ్‌మెంట్ కోసం సమర్థవంతమైన ఉపయోగకరమైన సమాచారాన్ని అందించడానికి కనిపిస్తాయి. రెండవ RASSF1 ప్రమోటర్ యొక్క మిథైలేషన్ కోసం ఇదే విధమైన విశ్వసనీయ పరీక్ష భవిష్యత్తులో మూల్యాంకనం చేయబడాలి. వ్యక్తీకరణ అధ్యయనానికి సంబంధించి, అన్ని విభిన్న RASSF1 ట్రాన్‌స్క్రిప్ట్‌ల కోసం ప్రత్యేకమైన ప్రోబ్‌లతో కూడిన కొత్త డిజైన్ వ్యూహం, అధ్యయనంలో అదనపు శక్తిని అందిస్తుంది మరియు చెదురుమదురు రొమ్ము క్యాన్సర్ యొక్క క్లినికల్ మూల్యాంకనంలో కొత్త RASSF1 బయోమార్కర్ల వినియోగాన్ని శక్తివంతం చేస్తుంది.