జర్నల్ ఆఫ్ స్టెమ్ సెల్ రీసెర్చ్ & థెరపీ

నైరూప్య

మురిన్ ఇంటర్‌జోన్ కణాల యొక్క లేజర్ క్యాప్చర్ మైక్రోడిసెక్షన్: లేయర్ ఎంపిక మరియు RNA దిగుబడి అంచనా

ఫ్లోరియన్ జెన్నర్, గెర్జో JVM వాన్ ఓష్, మైరెడ్ క్లియరీ, ఐరిస్ రిబిట్ష్, ఉల్రిచ్ సాయర్, రెనే వాన్ వీరెన్ మరియు పీటర్ బ్రామా

ఆబ్జెక్టివ్: ఆర్టిక్యులర్ కొండ్రోసైట్‌లు పిండం అభివృద్ధి చెందుతున్న కీళ్లలో ఇంటర్‌జోన్ అని పిలవబడే ప్రొజెనిటర్ కణాల యొక్క విభిన్న సమితి నుండి ఉద్భవించాయి. మేము ఈ అధ్యయనాన్ని నిర్వహించాము 1) సిటు హైబ్రిడైజేషన్ లేదా ఇమ్యునోహిస్టోకెమిస్ట్రీలో అనుబంధం లేకుండా ఇంటర్మీడియట్ మరియు బయటి ఇంటర్‌జోన్ పొరలను హిస్టోలాజికల్‌గా (క్రెసిల్ వైలెట్ ఉపయోగించి) గుర్తించడం సాధ్యమేనా అని నిర్ణయించడానికి; 2) జన్యు వ్యక్తీకరణ విశ్లేషణను అనుమతించడానికి వ్యక్తిగత పిండాల యొక్క ప్రతి ఇంటర్‌జోన్ పొర నుండి తగినంత మొత్తంలో RNA సేకరించవచ్చో లేదో నిర్ధారించడానికి; 3) ఖరీదైన యాంప్లిఫికేషన్ దశలకు ముందు RNA దిగుబడిని అంచనా వేయగల కొలతలను అభివృద్ధి చేయడం. పద్ధతులు: నాసెంట్ ఫెమోరోటిబియల్ జాయింట్ యొక్క బయటి (OI) మరియు ఇంటర్మీడియట్ (II) ఇంటర్‌జోన్ నుండి కణాలు మరియు 13.5 మరియు 15.5 రోజుల మురిన్ పిండాల యొక్క తొడ మరియు కాలి ఎముక యొక్క ఎపిఫైసల్ మృదులాస్థి (EC) లేజర్ క్యాప్చర్ మైక్రోడిసెక్షన్ (LC క్యాప్చర్ మైక్రోడిసెక్షన్) ఉపయోగించి సేకరించబడ్డాయి. తదనంతరం, తగిన పొర ఎంపికను నిర్ధారించడానికి మైక్రోఅరే విశ్లేషణ జరిగింది. సేకరించిన ఉపరితల వైశాల్యం మరియు LCM సమయంలో తీసిన ఫోటోమైక్రోగ్రాఫ్‌ల బూడిద విలువ (gv) కొలుస్తారు మరియు సంబంధిత సంబంధిత ఆప్టికల్ డెన్సిటీ (ROD) లెక్కించబడుతుంది మరియు RNA దిగుబడితో సహసంబంధం యొక్క డిగ్రీ మరియు ప్రాముఖ్యత నిర్ణయించబడింది. ఫలితాలు: OI, II మరియు EC నుండి కణాలను క్రెసిల్ వైలెట్ స్టెయినింగ్‌ని ఉపయోగించి హిస్టోలాజికల్‌గా గుర్తించవచ్చు మరియు లీనియర్ యాంప్లిఫికేషన్ మరియు మైక్రోఅరే విశ్లేషణ కోసం తగినంత మొత్తంలో RNAని అందించే LCMతో విజయవంతంగా పండించడం జరిగింది. RNA దిగుబడి పండించిన కణజాల ఉపరితల వైశాల్యం, సగటు gv మరియు సంబంధిత RODతో గణనీయంగా సంబంధం కలిగి ఉంటుంది. తీర్మానాలు: ఈ అధ్యయనం సెలెక్టివ్ లేజర్ క్యాప్చర్ మైక్రోడిసెక్షన్ మరియు ఇంటర్మీడియట్ మరియు బయటి పొర యొక్క మురిన్ ఇంటర్‌జోన్ కణాల తదుపరి మైక్రోఅరే విశ్లేషణ కోసం ఒక సాంకేతికతను అందిస్తుంది మరియు సేకరించిన కణజాల ప్రాంతాన్ని కొలవడం మరియు RODని లెక్కించడం ద్వారా RNA దిగుబడిని అంచనా వేయడానికి ఒక పద్ధతిని అందిస్తుంది. లీనియర్ T7-ఆధారిత యాంప్లిఫికేషన్ మరియు తదుపరి మైక్రోఅరే విశ్లేషణ కోసం ఉపయోగించబడే సుమారు 10 ng మొత్తం RNAని పొందేందుకు 13.5 రోజుల మురైన్ పిండాలలో కనీసం 1×106 μm2 మరియు 15.5 రోజుల మురైన్ పిండాలలో 3×106 μm2 కోయాలని మేము సిఫార్సు చేస్తున్నాము.