సింగిల్ సెల్ బయాలజీ

నైరూప్య

గోసిపియం హిర్సుటమ్ క్రోమోజోమ్ సబ్‌స్టిట్యూషన్ లైన్స్ నుండి వ్యక్తిగతంగా వేరుచేయబడిన గేమేట్‌ల జన్యురూపం

అహ్మద్ నసీర్ అజీజ్*, అబ్దుల్ ముజీద్ యాకుబు మరియు షెరియా సింగ్ హమాల్

US వ్యవసాయ భద్రత మరియు స్థిరమైన వ్యవసాయం కోసం ఒక ముఖ్యమైన పంటగా, పత్తి జన్యు మెరుగుదలకు వినూత్న విశ్లేషణాత్మక సాధనాల అభివృద్ధి అవసరం. వ్యక్తిగత గేమేట్‌లపై ఆధారపడిన జన్యు విశ్లేషణలు కనీస నమూనా అవసరం, మగ తల్లిదండ్రుల జన్యు గుర్తింపు మరియు మైక్రోస్పోర్‌ల హాప్లోయిడ్ స్వభావం కారణంగా పాలీప్లాయిడ్ యొక్క సంక్లిష్టతను అధిగమించడం వంటి అనేక ప్రయోజనాలను అందిస్తాయి. ఈ పరిశోధనలో జి. హిర్సుటమ్ బ్యాక్‌గ్రౌండ్‌లో జి. బార్బడెన్స్ క్రోమోజోమ్‌లు 17 మరియు 25తో టెట్రాప్లాయిడ్ కాటన్ (జి. హిర్సుటమ్ x జి. బార్బడెన్స్) క్రోమోజోమ్ సబ్‌స్టిట్యూషన్ (సిఎస్) లైన్‌లను ఉపయోగించారు. వ్యక్తిగతంగా వేరుచేయబడిన పుప్పొడి రేణువులు వాటి DNAలను విడుదల చేయడానికి మొలకెత్తాయి మరియు MasterAmp™ ఎక్స్‌ట్రా-లాంగ్ PCR కిట్ (EPICENTRE®, మాడిసన్, WI) ఉపయోగించి సవరించిన ప్రైమర్ ఎక్స్‌టెన్షన్ ప్రీ-యాంప్లిఫికేషన్ (PEP) ద్వారా జన్యుసంబంధమైన DNA పెంచబడింది. ఎంపిక చేసిన కాటన్ లైన్‌ల నుండి, టెట్రాడ్ డెవలప్‌మెంటల్ స్టేజ్ నుండి ఇప్పుడే విడుదలైన మైక్రోస్పోర్‌లు ఒక్కొక్కటిగా వేరుచేయబడ్డాయి మరియు REPLI-g సింగిల్ సెల్ కిట్ (QIAGEN, Valencia, CA) ఉపయోగించి మల్టిపుల్ డిస్‌ప్లేస్‌మెంట్ యాంప్లిఫికేషన్ (MDA) ద్వారా గేమేట్ DNA సంగ్రహించబడింది మరియు విస్తరించబడింది. PEP మరియు MDA యాంప్లిఫైడ్ ఇండివిడ్యువల్ గామేట్ DNAలతో పాటుగా పేరెంటల్ శాంపిల్స్ సింపుల్ సీక్వెన్స్ రిపీట్ (SSR) అలాగే IRD800 మరియు IRD-700 లేబుల్ చేయబడిన (Li-Cor, Lincoln, NE) యాంప్లిఫైడ్ ఫ్రాగ్మెంట్ లెంగ్త్ పాలిమార్ఫిజం (AFLP) పద్ధతులను ఉపయోగించి విశ్లేషించబడ్డాయి. TM-1, 3-79, CS-B17 మరియు CS-B25 కాటన్ లైన్‌లను విశ్లేషించడానికి పంతొమ్మిది SSR మరియు 28 AFLP ప్రైమర్ జతలు ఉపయోగించబడ్డాయి. పరిపక్వ పుప్పొడి మరియు ప్రారంభ ఉచిత మైక్రోస్పోర్ నమూనాల నుండి తల్లిదండ్రుల SSR మరియు AFLP మార్కర్ల విస్తరణ వరుసగా అగరోస్ మరియు పాలియాక్రిలమైడ్ జెల్ ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్ ఉపయోగించి తులనాత్మక జన్యు అధ్యయనాల కోసం ప్రత్యేకమైన సాధనాలను అందించింది.