జర్నల్ ఆఫ్ మైక్రోబియల్ & బయోకెమికల్ టెక్నాలజీ

నైరూప్య

ఎస్చెరిచియా కోలిలో SAK-ఫ్యూజ్డ్ హ్యూమన్ ఇంటర్ఫెరాన్ ఆల్ఫా యొక్క వ్యక్తీకరణ మరియు శుద్ధీకరణ

శార్దూల్ సలుంఖే, భాస్కర్జ్యోతి ప్రసాద్, కేతకీ సబ్నిస్-ప్రసాద్, అంజలి ఆప్టే-దేశ్‌పాండే మరియు శ్రీరామ్ పద్మనాభన్

మెరుగైన రీఫోల్డింగ్ మరియు E. coli యొక్క శుద్దీకరణ కోసం ఒక పద్ధతి మానవ ఇంటర్ఫెరాన్ ఉత్పన్నం -? (rhIFN ?2b) స్టెఫిలోకినేస్ (SAK) ఫ్యూజన్ ప్రోటీన్‌గా చేర్చబడిన శరీరాల నుండి వివరించబడింది. అటువంటి ఫ్యూజన్ ప్రోటీన్‌కు వ్యక్తీకరణ కోసం అరుదైన కోడన్‌ల అనుబంధం అవసరం లేదు మరియు 37?C వద్ద స్థిరంగా ఉన్నట్లు కనుగొనబడింది. రీఫోల్డింగ్ యొక్క సరైన పరిస్థితులలో అగ్రిగేషన్‌ను నిరోధించడానికి ఏ ఇతర ఏజెంట్ల అవసరం లేకుండా తేలికపాటి డీనాటరేటింగ్ ఏజెంట్‌ను ఉపయోగించడం ఉంటుంది. SAKrhIFN ?2b ఫ్యూజన్ ప్రోటీన్ రెండు దశల శుద్దీకరణను ఉపయోగించి విజయవంతంగా శుద్ధి చేయబడింది మరియు ఎంట్రోకినేస్‌ని ఉపయోగించి SAK మరియు IFN అనే రెండు శకలాలుగా విభజించబడింది. రెండు ప్రొటీన్‌లు జీవశాస్త్రపరంగా చురుకైనవిగా గుర్తించబడ్డాయి, అవి ఫ్యూజన్ భాగస్వాములిద్దరి సరైన మడతను చూపుతాయి. క్లీవ్డ్ IFN RP-HPLCలో బాక్టీరియా ఉత్పన్నమైన ట్యాగ్ చేయని ప్యూరిఫైడ్ IFN అలాగే ఎజిలెంట్ 2100 బయోఅనలైజర్‌లో ఎంట్రోకినేస్ క్లీవేజ్ తర్వాత IFN యొక్క సరైన ప్రాసెసింగ్‌ను సూచించే మాలిక్యులర్ బరువును చూపించింది. SAK-IFN యొక్క వ్యక్తీకరణ స్థాయిలు ఇలాంటి ప్రయోగాత్మక పరిస్థితులలో ట్యాగ్ చేయని IFNతో గమనించిన దాని కంటే రెండు రెట్లు ఎక్కువగా ఉన్నట్లు కనుగొనబడింది.