ఫార్మాస్యూటికా అనలిటికా ఆక్టా

నైరూప్య

రీకాంబినెంట్ ప్రొటీన్లను ఉపయోగించి Cyp3a4 జీవక్రియ-ఆధారిత నిరోధంతో సమాంతరంగా రివర్సిబుల్ సైటోక్రోమ్ P450 నిరోధం యొక్క స్క్రీనింగ్ కోసం వేగవంతమైన మరియు ఖర్చుతో కూడుకున్న పరీక్ష అభివృద్ధి

సెరెనెల్లా జాంబోన్, స్టెఫానో ఫోంటానా, రాఫెల్ లాంగి మరియు మహ్మద్ కజ్‌బాఫ్

ప్రస్తుత అధ్యయనంలో మేము అధిక నాణ్యత, వేగవంతమైన మరియు తక్కువ ఖర్చుతో కూడుకున్న CYP450 నిరోధక పరీక్షను అభివృద్ధి చేసాము, ఇది రివర్సిబుల్ మరియు CYP3A4 మెటబాలిజం-డిపెండెంట్ ఇన్హిబిషన్ (MDI) రెండింటినీ గుర్తించగల సామర్థ్యాన్ని కలిగి ఉంటుంది, ఇది రీకాంబినెంట్‌గా వ్యక్తీకరించబడిన P450 ఐసోఫామ్‌లు మరియు ఫ్లోరోజెనిక్ P450 సబ్‌స్ట్రేట్‌లను ఉపయోగించి. CYP3A4 ఐసోఫార్మ్ డైథాక్సిఫ్లోరెస్సిన్ (DEF)తో ప్రోబ్ సబ్‌స్ట్రేట్‌గా పరీక్షించబడుతుంది. IC50 విలువలను CYP3A4 ఐసోఫార్మ్‌కు వ్యతిరేకంగా పరీక్ష సమ్మేళనాల కోసం లెక్కించవచ్చు, ప్రోబ్ సబ్‌స్ట్రేట్ యొక్క జీవక్రియ రేటు ఆధారంగా, 10 నిమిషాలు కొలుస్తారు. అదనంగా, పరీక్ష సమ్మేళనాల యొక్క CYP3A4 జీవక్రియ-ఆధారిత నిరోధక సంభావ్యత 30 నిమిషాల పాటు డైథాక్సిఫ్లోరెస్సిన్ యొక్క జీవక్రియ రేటు నిర్ధారణ మరియు పొదిగే కాలం యొక్క ప్రతి 5 నిమిషాలకు IC50 విలువలను లెక్కించడం ద్వారా నిర్ణయించబడుతుంది. పరీక్ష సమ్మేళనాల యొక్క CYP3A4 జీవక్రియ-ఆధారిత నిరోధక సంభావ్యత యొక్క అంచనాను IC50 విలువలను పోల్చి నిర్ణయించవచ్చు, 10 మరియు 30 నిమిషాల పొదిగే తర్వాత కొలుస్తారు. ప్రత్యక్ష P450 నిరోధం కోసం ఎంపిక చేయబడిన CYP ఇన్హిబిటర్స్ మైకోనజోల్ మరియు జీవక్రియ-ఆధారిత నిరోధం కోసం ట్రోలియాండ్రోమైసిన్‌ను సానుకూల నియంత్రణలుగా ఉపయోగించి ఇంక్యుబేషన్ నిర్వహించబడింది. హామిల్టన్ లిక్విడ్-హ్యాండ్లింగ్ రోబోట్ టెక్నాలజీతో పాటు రెండు ఫ్లోరిమీటర్‌లు (టెకాన్) మరియు కస్టమ్ లాబొరేటరీ-ఇన్ఫర్మేషన్ మేనేజ్‌మెంట్‌తో 96-వెల్ ప్లేట్ ఫార్మాట్‌లో మొత్తం స్క్రీనింగ్ ప్రక్రియ పూర్తిగా ఆటోమేటెడ్ చేయబడింది. ఈ పరీక్ష ప్రస్తుతం లీడ్ ఆప్టిమైజేషన్ ప్రక్రియ ప్రారంభంలో స్క్రీన్ సమ్మేళనాలకు వర్తించబడుతుంది మరియు రివర్సిబుల్ మరియు/లేదా జీవక్రియ-ఆధారిత CYP450 నిరోధానికి కారణమయ్యే సమ్మేళనాలను గుర్తిస్తుంది మరియు అందువల్ల సాధ్యమైనంత తక్కువ DDI సంభావ్యతతో ఆ అణువులు లేదా రసాయన శ్రేణులను అభివృద్ధి చేస్తుంది. ఈ పరీక్ష ద్వారా ఉత్పత్తి చేయబడిన అధిక సంఖ్యలో డేటా సమాచార డేటాబేస్‌ను రూపొందించడానికి మరియు ప్రిడిక్టివ్ మోడల్‌లను మెరుగుపరచడానికి కూడా ఉపయోగించబడుతుంది.