జర్నల్ ఆఫ్ మైక్రోబియల్ & బయోకెమికల్ టెక్నాలజీ

నైరూప్య

రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్ మరియు మల్టీఎంజైమ్ రిస్ట్రిక్షన్ ఫ్రాగ్‌మెంట్ లెంగ్త్ పాలీమార్ఫిజం ఎనాలిసిస్ ఫర్ ఎస్చెరిచియా కోలిని వేగంగా గుర్తించడం

అకిఫుమి హోసోడా, అరటా కొమాబా, మిచిరు కిషిమోటో మరియు హిరోటో తమురా

ఆహారాలలో వ్యాధికారక సూక్ష్మజీవులను పర్యవేక్షించడానికి సాగు పద్ధతులు ఉపయోగించబడతాయి. అయినప్పటికీ, ప్రస్తుత పద్ధతులకు ఫలితాలను అందించడానికి కొన్ని రోజులు అవసరమవుతాయి మరియు మైక్రోబయోలాజికల్ విశ్లేషణ ఫలితాలు అందుబాటులోకి రాకముందే ఉత్పత్తులు తరచుగా అమ్మకానికి విడుదల చేయబడతాయి. మేము Escherichia coli K-12 మరియు O157:H7 (GTC 14536) (0 CFU/g మరియు 1×101–104 CFU/g)తో టీకాలు వేయబడిన మోడల్ ఆహార నమూనాలను ఉపయోగించి RNA వెలికితీత మరియు సూక్ష్మజీవులను గుర్తించే వ్యవస్థను అభివృద్ధి చేసాము. RNA వెలికితీతకు ముందు, ఆహార నమూనాలలో ప్రత్యక్ష లేదా చనిపోయిన కణాలు టీకాలు వేయబడ్డాయి, నమూనాలను సజాతీయంగా మార్చారు మరియు సేకరించిన RNAలు యాదృచ్ఛిక 6-మెర్ ఉపయోగించి cDNAలను సంశ్లేషణ చేయడానికి ఉపయోగించబడ్డాయి. లక్ష్య జన్యువులను విశ్లేషించడానికి PCR ఉపయోగించబడింది మరియు పరిమితి శకలం పొడవు పాలిమార్ఫిజం (RFLP) విశ్లేషించడానికి PCR ఉత్పత్తులు రెండు పరిమితి ఎంజైమ్‌లతో (HhaI మరియు HaeIII) జీర్ణించబడ్డాయి. PCR ప్రత్యక్ష కణాల యొక్క 1×101 CFU/g నమూనాల వరకు RNA వెలికితీత మరియు cDNA సంశ్లేషణను నిర్ధారించింది. మల్టీఎంజైమ్ RFLP (MeRFLP) పొందిన DNA శకలాలు సైద్ధాంతిక శకలాల పరిమాణాలకు అనుగుణంగా ఉన్నాయని చూపించింది, రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్-MeRFLP (RT-MeRFLP) లక్ష్య బ్యాక్టీరియాను గుర్తించగలదని సూచిస్తుంది. ఈ ఫలితాలు RT-MeRFLP, సంస్కృతి అవసరం లేని మరియు 6.5 గంటలలోపు పూర్తి చేయగలవు, ఆహారంలో బ్యాక్టీరియాను గుర్తించడానికి తక్కువ-ధర, వేగవంతమైన మరియు నమ్మదగిన వ్యవస్థ కోసం ఒక మంచి విధానం.