జర్నల్ ఆఫ్ బయోక్వివలెన్స్ & బయోఎవైలబిలిటీ

నైరూప్య

హై పెర్ఫార్మెన్స్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ ద్వారా మానవ ప్లాస్మాలో విటమిన్ D-2, విటమిన్ D-3 మరియు వాటి 25-హైడ్రాక్సీ మెటాబోలైట్‌ల యొక్క ఏకకాల పరిమాణీకరణ

సయ్యద్ ఎన్ అల్వీ, అహ్మద్ యూసుఫ్ మరియు ముహమ్మద్ ఎం హమ్మమీ

విటమిన్ D-2 (VD-2), విటమిన్ D-3 (VD-3), 25-హైడ్రాక్సీవిటమిన్ D-2 [25 (OH) VD-2 యొక్క ఏకకాల నిర్ధారణ కోసం సరళమైన మరియు విశ్వసనీయమైన హై పెర్ఫార్మెన్స్ లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ (HPLC) పద్ధతి ], మరియు మానవ ప్లాస్మాలో 25-హైడ్రాక్సీవిటమిన్ D-3 [25(OH) VD-3] అభివృద్ధి చేయబడింది మరియు ధృవీకరించబడింది. ప్లాస్మా నమూనాలు మిథనాల్ మరియు 2-ప్రొపోనాల్ మిశ్రమంతో డీప్రొటీనైజ్ చేయబడ్డాయి మరియు హెక్సేన్‌తో సంగ్రహించబడ్డాయి. బాష్పీభవనం తర్వాత, అవశేషాలు మిథనాల్‌లో కరిగిపోతాయి: నీరు (9.6:0.4, v/v), సెంట్రిఫ్యూజ్ చేయబడి, ఆపై స్పష్టమైన ద్రావణాన్ని జోర్‌బాక్స్ C18 కాలమ్‌లోకి ఇంజెక్ట్ చేస్తారు. మొబైల్ ఫేజ్ (గ్రేడియంట్ ఎలుషన్ మోడ్)లో మిథనాల్, అసిటోనిట్రైల్ మరియు వాటర్ (pH = 3.0) ఉంటాయి; ఫోటోడియోడ్ అర్రే డిటెక్టర్ (తరంగదైర్ఘ్యం 265 nm వద్ద సెట్ చేయబడింది) ద్వారా eluents పర్యవేక్షించబడ్డాయి. ప్లాస్మాలో VD-2, VD-3, 25(OH) VD-2, 25(OH) VD-3 యొక్క ఏకాగ్రత మరియు ISకి వాటి గరిష్ట విస్తీర్ణ నిష్పత్తి మధ్య సంబంధం 5 - 100 ng/ పరిధిలో సరళంగా ఉంది. మి.లీ. ఇంటర్-డే మరియు ఇంట్రా-డే అస్సే కోసం వైవిధ్యం యొక్క గుణకాలు అన్నీ ≤ 9.7% మరియు పక్షపాతాలు ≤ 13.1%. ప్లాస్మా నుండి VD-2, VD-3, 25(OH) VD-2, మరియు 25(OH) VD-3 యొక్క సగటు వెలికితీత రికవరీలు 80% పైగా ఉన్నాయి. ఆరోగ్యకరమైన విషయాల నుండి పొందిన ప్లాస్మాలో విటమిన్ డి స్థాయిలను నిర్ణయించడానికి ఈ పద్ధతి వర్తించబడింది. ఇంకా, క్లినికల్ లాబొరేటరీలో ఎదురయ్యే వివిధ పరిస్థితులలో ప్లాస్మాలో VD-2, VD-3, 25(OH) VD-2, మరియు 25(OH) VD-3 యొక్క స్థిరత్వాన్ని అంచనా వేయడానికి ఇది ఉపయోగించబడింది.