జర్నల్ ఆఫ్ స్టెమ్ సెల్ రీసెర్చ్ & థెరపీ

నైరూప్య

సాధారణ షేకింగ్ పద్ధతిని ఉపయోగించి న్యూరల్ స్టెమ్ సెల్ సంతానాన్ని వేరు చేయడం నుండి అపరిపక్వ న్యూరాన్‌లను శుద్ధి చేయడం

హసన్ అజారీ, షరారే షరీఫిఫర్, రోయా పి డారియోష్, మర్యమ్ రెహమాన్, జెఫ్ ఎమ్ ఫోర్టిన్ మరియు బ్రెంట్ ఎ రేనాల్డ్స్

ఆబ్జెక్టివ్: సుసంపన్నమైన న్యూరానల్ సెల్ పాపులేషన్‌లు ప్రయోగశాల పరిశోధనలు మరియు సెల్ థెరపీ అప్లికేషన్‌ల కోసం విలువైన సాధనాలు. అయినప్పటికీ, అందుబాటులో ఉన్న సెల్ ప్యూరిఫైయింగ్ విధానాలు వాటి సార్వత్రిక ప్రాప్యతను పరిమితం చేసే FACS లేదా MACS వంటి ఖరీదైన పరికరాలను డిమాండ్ చేస్తాయి. ఈ అధ్యయనంలో, ఎటువంటి ఖరీదైన కణ విభజన సాధనాలను ఉపయోగించకుండా వాటి అవకలన సబ్‌స్ట్రేట్ అటాచ్‌మెంట్ లక్షణాల ఆధారంగా న్యూరల్ స్టెమ్ సెల్ (dNSC) సంతానాన్ని వేరు చేయడం నుండి అపరిపక్వ న్యూరానల్ కణాలను శుద్ధి చేయడానికి మేము సమర్థవంతమైన పద్ధతిని అభివృద్ధి చేసాము. పద్ధతులు: న్యూరోస్పియర్ అస్సే ఉపయోగించి పిండం రోజు 14 ఎలుకల మెదడులోని గ్యాంగ్లియోనిక్ ఎమినెన్స్ నుండి న్యూరల్ స్టెమ్ సెల్స్ సేకరించబడ్డాయి. న్యూరోస్పియర్‌లు అప్పుడు ఒకే కణాలుగా విడదీయబడ్డాయి మరియు న్యూరోబ్లాస్ట్ అస్సే పద్ధతిని ఉపయోగించడం ద్వారా వేరు చేయబడ్డాయి. క్లుప్త ట్రిప్సినైజేషన్ తరువాత, అంతర్లీన ఆస్ట్రోసైటిక్ సెల్ మోనోలేయర్ నుండి టాప్ న్యూరానల్ సెల్ క్లస్టర్‌లను వేరు చేయడానికి dNSC సంస్కృతిని 30 నిమిషాల పాటు 150 rpm వద్ద శాంతముగా కదిలించారు. న్యూరోనల్ ప్యూరిఫికేషన్ దిగుబడి, ఆస్ట్రోసైట్ కాలుష్యం మరియు విభజన కణాల ఉనికిని PSANCAM యాంటీబాడీని ఉపయోగించి MACS శుద్దీకరణ పద్ధతితో పోల్చారు. ఫలితాలు: MACS ఉపయోగించి 97.1 ± 0.45% న్యూరానల్ దిగుబడి సాధించబడింది; ఇది గణనీయంగా భిన్నంగా లేని షేకింగ్ పద్ధతిని ఉపయోగించి 97.9 ± 0.6%కి చేరుకుంది. మరోవైపు, MACS విధానంలో ఆస్ట్రోసైట్‌ల శాతం 1.18 ± 0.15%, కానీ అది షేకింగ్ పద్ధతిని ఉపయోగించి 0.6 ± 0.15%కి గణనీయంగా తగ్గింది. అంతేకాకుండా, MACS మరియు షేకింగ్ మెథడ్స్‌లోని వివిక్త కణాలలో 4.41 ± 0.23% మరియు 5.3 ± 0.4% వరుసగా Ki-67 ఇమ్యునోరేయాక్టివ్ డివైడింగ్ సెల్‌లు, వీటిలో 97.34 ± 1.6% మరియు 97.9 ± 0.7% సహ-ఎక్స్‌ప్రెస్సింగ్-3. ట్యూబులిన్, వారి న్యూరానల్‌ను నిర్ధారిస్తుంది గుర్తింపు. అదనంగా, న్యూరల్-కాలనీ ఫార్మింగ్ సెల్ అస్సే ఆధారంగా, షేకింగ్ పద్ధతి ఫలితంగా ఎటువంటి విశ్వసనీయమైన NSC కాలుష్యం లేకుండా సజాతీయ న్యూరానల్ సెల్ జనాభా ఏర్పడింది. తీర్మానాలు: షేకింగ్ ప్యూరిఫికేషన్ పద్ధతి dNSC సంతానం నుండి అపరిపక్వ న్యూరాన్‌లను సులభంగా, తక్కువ ఖర్చుతో, సమర్ధవంతంగా మరియు పెద్ద ఎత్తున వేరు చేయడానికి అనుమతిస్తుంది, ఇది ప్రాథమిక మరియు క్లినికల్ అప్లికేషన్‌లకు ప్రయోజనకరంగా ఉంటుంది.