జర్నల్ ఆఫ్ స్టెమ్ సెల్ రీసెర్చ్ & థెరపీ

నైరూప్య

LINE-1 ఆధారిత ఇన్సర్షనల్ మ్యూటాజెనిసిస్ స్క్రీన్‌లు ఎంబ్రియోనిక్ స్టెమ్ సెల్ డిఫరెన్షియేషన్‌లో పాల్గొన్న జన్యువులను గుర్తించడం

సంగ్-హన్ లీ మరియు డానీ రంగసామి

నేపధ్యం: ఈ కణాలను చికిత్సా ప్రయోజనాల కోసం ఉపయోగించుకునే అవకాశం వాస్తవం కావడానికి ముందు పిండ మూలకణాల యొక్క అంతర్గత లక్షణాల గురించి తెలుసుకోవడం చాలా అవసరం. ఒక నిర్దిష్ట సమలక్షణాన్ని అందించడానికి సరిపోయే జన్యువులను గుర్తించడానికి ఇన్సర్షనల్ మ్యూటాజెనిసిస్ స్క్రీన్‌లు విస్తృతంగా ఉపయోగించబడతాయి; అయినప్పటికీ, అటువంటి విధానాల యొక్క అప్లికేషన్లు మౌస్ నమూనాలకు పరిమితం చేయబడ్డాయి. అందువల్ల, మూల కణాలలో జన్యు ఆవిష్కరణ విధానాలను అనుమతించే కొత్త DNA ట్రాన్స్‌పోసన్ వ్యవస్థను అభివృద్ధి చేయాల్సిన అవసరం ఉంది.
పద్ధతులు: మౌస్ పిండ మూలకణాల నిర్వహణ మరియు భేదంలో పాల్గొన్న జన్యువులను గుర్తించడానికి జీన్ ట్రాప్ వెక్టార్‌గా పొడవైన అణు మూలకం 1 (LINE -1) రెట్రోట్రాన్స్‌పోసన్‌ను ఉపయోగించే అవకాశాన్ని అన్వేషించడానికి ఈ అధ్యయనం జరిగింది.
ఫలితాలు: మేము మా వెక్టర్ యొక్క వెన్నెముకలో పరంజా/మ్యాట్రిక్స్ అటాచ్‌మెంట్ ప్రాంతాలను ఉపయోగించి ఎపిసోమల్, నాన్‌వైరల్ LINE-1 రెట్రోట్రాన్స్‌పోసన్ సిస్టమ్‌ను అభివృద్ధి చేసాము. ఈ జీన్ ట్రాప్ వెక్టర్ GFP మార్కర్‌ను కలిగి ఉంటుంది, దీని వ్యక్తీకరణ విజయవంతమైన ఇన్సర్షనల్ మ్యూటాజెనిసిస్ తర్వాత మాత్రమే జరుగుతుంది. ఈ వెక్టర్‌ని ఉపయోగించడం ద్వారా, GFP వ్యక్తీకరణతో పాటు, మేము రెండు తెలిసిన జన్యువులతో సహా అంతరాయం కలిగించిన జన్యువులను ప్రదర్శించే నాలుగు వ్యక్తిగత పిండ మూలకణ క్లోన్‌లను విజయవంతంగా వేరు చేసాము. మేము విలోమ PCR విధానాన్ని ఉపయోగించి ఈ జన్యువుల గుర్తింపును ధృవీకరించాము మరియు shRNAలు మరియు పిండ మూలకణాల యొక్క విభిన్నమైన గుర్తులను ఉపయోగించి సెల్ డిఫరెన్సియేషన్‌లో వాటి పనితీరును ధృవీకరించాము .
తీర్మానాలు: ఈ చొప్పించే ఉత్పరివర్తనను ఉపయోగించడంలో సౌలభ్యం మరియు GFP వ్యక్తీకరణ ద్వారా అంతరాయం కలిగించిన జన్యువులతో కణాలను గుర్తించే సరళత ఈ LINE-1 వెక్టర్‌ను పిండ మూలకణం మరియు క్యాన్సర్ మూలకణ జన్యు ఆవిష్కరణకు మంచి సాధనంగా మార్చింది.