గుస్తావో డి. మెండిస్, ఫాబియానా డి. మెండిస్, మరినాల్వా ఫెర్రీరా సంపాయో, ఆంటోనియో సెర్గియో సిల్వేరా, లు షి చెన్, ఖలీద్ ఎం. అల్ఖర్ఫీ మరియు గిల్బెర్టో డి నుచీ
పారాసెటమాల్ను అంతర్గత ప్రమాణంగా (IS) ఉపయోగించి మానవ ప్లాస్మాలో హైడ్రాక్సోకోబాలమిన్ను లెక్కించడానికి వేగవంతమైన, సున్నితమైన మరియు నిర్దిష్ట పద్ధతి వివరించబడింది. సేంద్రీయ ద్రావకం (ఇథనాల్ 100%; -20 ° C) ఉపయోగించి ద్రవ-ద్రవ వెలికితీత ద్వారా ప్లాస్మా నుండి విశ్లేషణ మరియు IS సంగ్రహించబడ్డాయి. ఎలక్ట్రోస్ప్రే టెన్డం మాస్ స్పెక్ట్రోమెట్రీ (HPLC-MS-MS)తో పాటు అధిక పనితీరు గల లిక్విడ్ క్రోమాటోగ్రఫీ ద్వారా ఎక్స్ట్రాక్ట్లు విశ్లేషించబడ్డాయి. క్రోమాటోగ్రఫీ Prevail C8 3 μm, విశ్లేషణాత్మక కాలమ్ (2.1×100 mm id)పై ప్రదర్శించబడింది. ఈ పద్ధతి 3.4 నిమిషాల క్రోమాటోగ్రాఫిక్ రన్ టైమ్ను కలిగి ఉంది మరియు 5-400 ng.mL-1 (r>0.9983) పరిధిలో లీనియర్ కాలిబ్రేషన్ కర్వ్ను కలిగి ఉంది. పరిమాణం యొక్క పరిమితి 5 ng.mL-1. అంతర్గత ప్రమాణాన్ని ఉపయోగించకుండా పద్ధతి కూడా ధృవీకరించబడింది. ISతో ఇంట్రా-బ్యాచ్ ధ్రువీకరణలో ఖచ్చితత్వం 9.6%, 8.9%, 1.0% మరియు 2.8% అయితే IS లేకుండా వరుసగా 5, 15, 80 మరియు 320 ng/mLకి 9.2%, 8.2%, 1.8% మరియు 1.5% . ISతో ఇంట్రా-బ్యాచ్ ధ్రువీకరణలో ఖచ్చితత్వం 108.9%, 99.9%, 98.9% మరియు 99.0% అయితే IS లేకుండా వరుసగా 5, 15, 80 మరియు 320ng.కి 101.1%, 99.3%, 97.5% మరియు 92.5%. ISతో ఇంటర్-బ్యాచ్ ధ్రువీకరణలో ఖచ్చితత్వం 9.4%, 6.9%, 4.6% మరియు 5.5% అయితే IS లేకుండా వరుసగా 5, 15, 80 మరియు 320 ng/mLకి 10.9%, 6.4%, 5.0% మరియు 6.2%. . ISతో ఇంటర్-బ్యాచ్ ధ్రువీకరణలో ఖచ్చితత్వం 101.9%, 104.1%, 103.2% మరియు 99.7% అయితే IS లేకుండా వరుసగా 5, 15, 80 మరియు 320కి 94.4%, 101.2%, 101.6% మరియు 96.0%. ఈ HPLC-MS-MS విధానం రెండు లింగాల (10 మంది పురుషులు మరియు 10 మంది స్త్రీలు) ఆరోగ్యకరమైన వాలంటీర్లలో 5000 μg ఇంట్రామస్కులర్ ఇంజెక్షన్ తరువాత హైడ్రాక్సో కోబాలమిన్ యొక్క ఫార్మకోకైనటిక్స్ను అంచనా వేయడానికి ఉపయోగించబడింది. వాలంటీర్లు క్రింది క్లినికల్ లక్షణాలను కలిగి ఉన్నారు (లింగం ప్రకారం మరియు సగటు ± SD [పరిధి]గా వ్యక్తీకరించబడింది): పురుషులు: వయస్సు: 32.40 ± 8.00 y [23.00-46.00], ఎత్తు: 1.73 ± 0.07 మీ [1.62-1.85], శరీర బరువు : 72.48 ± 10.22 కి.గ్రా [60.20- 88.00]; స్త్రీలు: వయస్సు: 28.60 ± 9.54 y [18.00-44.00], ఎత్తు: 1.60 ± 0.05 m [1.54-1.70], శరీర బరువు: 58.64 ± 6.09 Kg [51.70- 66.70]. హైడ్రాక్సోకోబాలమిన్ ప్లాస్మా ఏకాగ్రత వర్సెస్ టైమ్ కర్వ్ల నుండి క్రింది ఫార్మకోకైనటిక్ పారామితులు పొందబడ్డాయి: AUClast, T1/2, Tmax, Vd, Cl, Cmax మరియు క్లాస్ట్. ఫార్మకోకైనటిక్ పారామితులు Cmax కోసం 120 (± 25) ng/mL, AUClast కోసం 2044 (± 641) ng.h/mL, క్లాస్ట్ కోసం 8 (± 3.2) ng.mL-1, T1/ కోసం 38 (± 15.8) గం. Tmax కోసం 2 మరియు 2.5 (పరిధి 1-6) గం. స్త్రీ వాలంటీర్లు పురుషుల 2383 ± 343 ng.h/తో పోలిస్తే ముఖ్యమైన (p=0.0136) తక్కువ AUC (1706 ± 704) ng.h/mL) మరియు పెద్ద (p=0.0205) క్లియరెన్స్ (2.91 ± 1.41 L/hr) అందించారు. mL మరియు 1.76 ± 0.23 L/hr, వరుసగా. ఈ ఫార్మకోకైనటిక్ వ్యత్యాసాలు మహిళా రోగులలో విటమిన్ B12 లోపం యొక్క అధిక ప్రాబల్యాన్ని వివరిస్తాయి . వివరించిన పద్ధతి అంతర్గత ప్రమాణాన్ని ఉపయోగించకుండా బాగా ధృవీకరించబడింది మరియు ఈ విధానాన్ని ఇతర HPLC-MS-MS పద్ధతులలో పరిశోధించాలి.