బయోకెమిస్ట్రీ & అనలిటికల్ బయోకెమిస్ట్రీ

నైరూప్య

లివర్ స్కావెంజర్ రిసెప్టర్స్ ద్వారా హెపారిన్ క్లియరెన్స్

ఎడ్వర్డ్ ఎన్. హారిస్

GPCRలపై పనిచేసే హిట్ లేదా లీడ్ సమ్మేళనాలను గుర్తించడం కోసం HTS ప్రయోగశాలలలో బైండింగ్ మరియు సిగ్నలింగ్ కోసం పరీక్షా సాంకేతికతల శ్రేణి అభివృద్ధి చేయబడింది. [35S] GTPγS బైండింగ్ అస్సే ఇప్పటికీ గ్రాహక క్రియాశీలతను ప్రదర్శించడానికి ఉపయోగకరమైన మరియు సరళమైన సాంకేతికతగా మిగిలిపోయింది మరియు ఇది కొన్ని ఫంక్షనల్, సెల్-ఫ్రీ అస్సేస్‌లో ఒకటి. అయినప్పటికీ, దాని రేడియోధార్మిక స్వభావం సాధారణ ప్రయోగశాల ఆచరణలో మరియు అధిక-నిర్గమాంశ ప్రయోగాలలో దాని వినియోగానికి స్పష్టమైన పరిమితులను విధిస్తుంది. ఇక్కడ, మేము యూరోపియం-లేబుల్ చేయబడిన GTP అనలాగ్‌ని ఉపయోగించి పరీక్ష యొక్క కొత్త నాన్-రేడియోయాక్టివ్ వెర్షన్‌ను అభివృద్ధి చేసాము, దీనిలో యూరోపియం-GTP బైండింగ్‌ని సమయ-పరిష్కార ఫ్లోరోసెన్స్‌ని ఉపయోగించి పరీక్షించవచ్చు. మా ప్రయత్నాలకు కొనసాగింపుగా, ఈ పరీక్ష హిస్టామిన్ 3 గ్రాహకాల కోసం స్వీకరించబడింది. తెలిసిన హిస్టామిన్ 3 అగోనిస్ట్‌లు (ఇమెటిట్, ఇమ్మెపిప్, మిథైల్‌హిస్టామైన్, ప్రాక్సిఫాన్ మరియు హిస్టామిన్) మరియు వ్యతిరేకులు (GSK189254, క్లోబెన్‌ప్రోపిట్ మరియు థియోపెరమైడ్) ఔషధాలను పరీక్షించడం ద్వారా పరీక్ష ఆకృతిని ప్రత్యేకంగా విశ్లేషించారు. ఆప్టిమైజ్ చేయబడిన అస్సే పరిస్థితులలో, బైండింగ్ అస్సేలోని పొటెన్సీలు (pEC50 & PKB) ఐసోటోపిక్ ఫంక్షనల్ యాక్టివిటీ అస్సేలో గతంలో పొందిన వాటితో మంచి ఒప్పందంలో ఉన్నాయి. Eu-GTP బైండింగ్ అస్సే బేసల్ గణనల కంటే అధిక శాతంతో అత్యంత పటిష్టంగా (Z' కారకం 0.84) ఉన్నట్లు గమనించబడింది. ఈ పరీక్షను హిస్టామిన్ 3 రిసెప్టర్ వ్యతిరేకుల స్క్రీనింగ్ కోసం స్క్రీనింగ్ క్యాస్కేడ్ యొక్క ఒక భాగం వలె ఉపయోగించవచ్చు.