సింగిల్ సెల్ బయాలజీ

నైరూప్య

సైడ్ పాపులేషన్ ఫినోటైప్ ఆధారంగా CWR-R1 ప్రోస్టేట్ క్యాన్సర్ కణ రేఖ మరియు మానవ ప్రోస్టేట్ కణజాలం నుండి వేరుచేయబడిన ఒకే కణాలలో జన్యు వ్యక్తీకరణ

కళ్యాణ్ జె గంగవరపు, ఆస్టిన్ మిల్లర్ మరియు వెండి జె హస్

సింగిల్ సెల్ స్థాయిలో బయోలాజికల్ సిగ్నల్‌లను నిర్వచించడం వల్ల డ్రైవర్ మ్యుటేషన్‌లను ప్రారంభించే క్యాన్సర్‌ను గుర్తించవచ్చు. మైక్రోఫ్లూయిడిక్స్ సార్టింగ్ మరియు మాగ్నెటిక్ క్యాప్చరింగ్ సిస్టమ్‌ల వంటి సింగిల్ సెల్‌లను వేరుచేసే సాంకేతికతలు వంటి పరిమితులను కలిగి ఉంటాయి: అధిక ధర, శ్రమ తీవ్రత మరియు పెద్ద సంఖ్యలో కణాల అవసరం. అందువల్ల, ప్రామాణిక రివర్స్ ట్రాన్స్‌క్రిప్షన్ PCR (RT-PCR)తో సహా సాధారణ ప్రయోగశాల వినియోగాన్ని ప్రోత్సహించడానికి విశ్లేషణ కోసం సింగిల్ సెల్ ఐసోలేషన్‌ను అనుమతించే ఖర్చు మరియు శ్రమతో కూడిన సమర్థవంతమైన, విశ్వసనీయమైన మరియు పునరుత్పాదక సాంకేతికతను గుర్తించడం మా ప్రస్తుత అధ్యయనం యొక్క లక్ష్యం.

ప్రస్తుత అధ్యయనంలో, ATP బైండింగ్ క్యాసెట్ (ABC) ట్రాన్స్‌పోర్టర్ ఎఫ్లక్స్ ఆఫ్ డై సైకిల్ వైలెట్ (DCV), సైడ్ పాపులేషన్ అస్సే ఆధారంగా మేము CWR-R1 ప్రోస్టేట్ క్యాన్సర్ సెల్ లైన్ మరియు హ్యూమన్ ప్రోస్టేట్ క్లినికల్ స్పెసిమెన్‌ల నుండి వేరుచేయబడిన సింగిల్ ప్రోస్టేట్ కణాలను ఉపయోగించాము. నాలుగు జన్యువుల వ్యక్తీకరణ: ABCG2; ఆల్డిహైడ్ డీహైడ్రోజినేస్1A1 (ALDH1A1); ఆండ్రోజెన్ రిసెప్టర్ (AR); మరియు ఎంబ్రియోనిక్ స్టెమ్ సెల్ మార్కర్, అక్టోబర్-4, నిర్ణయించబడ్డాయి.

CWR-R1 సెల్ లైన్‌లోని ప్రస్తుత అధ్యయనం యొక్క ఫలితాలు 67% సింగిల్ సైడ్ పాపులేషన్ కణాలలో మరియు 17% లేదా 100% నాన్-సైడ్ పాపులేషన్ కణాలలో వరుసగా ABCG2 మరియు ALDH1A1 జన్యు వ్యక్తీకరణను చూపించాయి. క్లినికల్ నమూనాల నుండి వేరుచేయబడిన ఒకే కణాలను ఉపయోగించి చేసిన అధ్యయనాలు అక్టోబర్-4 జన్యువు కేవలం 22% సింగిల్ సైడ్ పాపులేషన్ కణాలలో మరియు 78% సింగిల్ నాన్-సైడ్ పాపులేషన్ కణాలలో మాత్రమే కనుగొనబడిందని తేలింది. అయితే, AR జన్యు వ్యక్తీకరణ 100% సింగిల్ సైడ్ పాపులేషన్‌లో మరియు అదే మానవ ప్రోస్టేట్ క్లినికల్ స్పెసిమెన్ నుండి వేరుచేయబడిన నాన్-సైడ్ పాపులేషన్ కణాలలో ఉంది.

సెల్ లైన్లు మరియు ఎంజైమ్‌గా జీర్ణమయ్యే కణజాలం నుండి ఒకే కణాలలో జన్యు వ్యక్తీకరణను గుర్తించడానికి FACS ద్వారా వేరుచేయబడిన ఒకే కణాలపై RT-PCR నిర్వహించడం విజయవంతంగా నిర్వహించబడుతుందని ఈ అధ్యయనాలు చూపిస్తున్నాయి. ఈ అధ్యయనాలు సాధారణ అవును/కాదు వ్యక్తీకరణ రీడౌట్‌ను అందజేస్తుండగా, మరింత సున్నితమైన పరిమాణాత్మక RT-PCR అవసరమైతే మరింత సమాచారాన్ని అందించగలదు.