జర్నల్ ఆఫ్ స్టెమ్ సెల్ రీసెర్చ్ & థెరపీ

నైరూప్య

Dgcr8 పిండ మూల కణాలలో కార్డియాక్ లినేజ్ స్పెసిఫికేషన్ కోసం ఎంతో అవసరం

జియోంగ్ లీ, అలైన్ వాన్ మిల్, అన్నెబెల్ ఎమ్ వాన్ డి వ్రగ్ట్, పీటర్ ఎ డోవెండాన్స్ మరియు జూస్ట్ పిజి స్లూయిజ్టర్

లక్ష్యం: కార్డియోజెనిక్ డిఫరెన్సియేషన్‌తో సహా సెల్యులార్ ప్రవర్తన మరియు వంశ వివరణలో మైక్రోఆర్‌ఎన్‌ఏలు ముఖ్యమైన పాత్రలు పోషిస్తాయని చూపబడింది. అయినప్పటికీ, సరైన సెల్యులార్ మోడల్ లేకపోవడం వల్ల కార్డియోమయోసైట్ డిఫరెన్సియేషన్‌లో వారి పాత్రల గురించి పూర్తి అవగాహనకు ఆటంకం ఏర్పడింది. ఇక్కడ, మేము ముఖ్యమైన మైక్రోప్రాసెసర్ Dgcr8 (లేదా పాషా) లేని ఎంబ్రియోనిక్ స్టెమ్ సెల్ (ESC)ని ఉపయోగించాము, ఇది కార్డియాక్ డిఫరెన్సియేషన్‌లో మరియు మరింత ఖచ్చితమైన లక్ష్య ఎంపిక కోసం వారి పాత్రను అధ్యయనం చేయడానికి వ్యక్తిగత miRNAల పరిచయాన్ని అనుమతిస్తుంది.
పద్ధతులు: Dgcr8 KO ESC మౌస్ ఎంబ్రియోనిక్ ఫైబ్రోబ్లాస్ట్ ఫీడర్‌లతో LIF-అనుబంధ ESC మాధ్యమంలో కల్చర్ చేయబడింది మరియు పిండ శరీర-ఆధారిత డిఫరెన్సియేషన్ ప్రోటోకాల్ ఉపయోగించి కార్డియాక్ డిఫరెన్సియేషన్ ప్రేరేపించబడింది. ఇమ్యునోఫ్లోరోసెంట్ స్టెయినింగ్ మరియు సెమీ-క్వాంటిటేటివ్ పిసిఆర్ ఉపయోగించి కార్డియోజెనిక్ మార్కర్స్ మరియు హెటెరోక్రోమాటిన్ మార్పుల యొక్క mRNA మరియు ప్రోటీన్ స్థాయిలను కొలవడం ద్వారా భేదం పర్యవేక్షించబడుతుంది.
ఫలితాలు మరియు ముగింపు: Dgcr8 KO ESC లలో పెద్ద సంఖ్యలో చిన్న RNAలు లేవని మేము చూపించాము, అవి పరిణతి చెందిన మైక్రోఆర్‌ఎన్‌ఏలకు మాత్రమే పరిమితం కాదు. KO కణాలు తక్కువ విస్తరణ రేటును కలిగి ఉన్నాయి మరియు కార్డియాక్ వంశంలోకి వేరు చేయలేకపోయాయి. మా ఆశ్చర్యానికి, మైక్రోఆర్ఎన్ఎ ప్రాసెసింగ్‌లో లోపంతో పాటు, Dgcr8 KO పిండ మూలకణాలు సరైన హెటెరోక్రోమాటిన్‌ను ఏర్పరచలేవు మరియు జెనోటాక్సిక్ సెంట్రోమెరిక్ పునరావృత మూలకాలను నిష్క్రియం చేయలేవు. మైక్రోఆర్ఎన్ఎ ప్రాసెసింగ్‌ను నియంత్రించడంతో పాటు, హెటెరోక్రోమాటిన్ సైలెన్సింగ్‌లో డిజిసిఆర్8 గతంలో గుర్తించబడని పాత్రను అందించవచ్చని మా ఫలితాలు వాదిస్తున్నాయి.