బయోమోలిక్యులర్ రీసెర్చ్ & థెరప్యూటిక్స్ జర్నల్

నైరూప్య

ఎన్-హైడ్రాక్సీసల్ఫోసుసినిమైడ్ లింక్డ్ బయోటిన్ రియాజెంట్‌లచే యాంజియోటెన్సిన్ II యొక్క సంక్లిష్ట ఎసిలేషన్

క్విన్‌ఫెంగ్ లియు, ఆండ్రెస్ లామ్ మరియు అచ్యుత్ కతురియా

N-Hydroxysulfosuccinimide-లింక్డ్ బయోటిన్‌లు (sulfoNHS-బయోటిన్‌లు) అనేది నీటిలో కరిగే బయోటిన్ ట్యాగ్‌లు, ప్రాథమిక అమైన్‌ల యొక్క వేగవంతమైన N-ఎసిలేషన్ ద్వారా ప్రోటీన్‌లకు బయోటిన్ మోయిటీని సంయోగం చేయడానికి సాధారణంగా ఉపయోగిస్తారు. యాంజియోటెన్సిన్ II (Ag-II) యొక్క టైరోసిన్‌పై సల్ఫోఎన్‌హెచ్‌ఎస్‌బియోటిన్ ద్వారా ఊహించని O-ఎసిలేషన్ మరియు మూడవ సైట్‌లోని ఎసిలేషన్‌ను వర్గీకరించలేకపోయింది, Ag-II యొక్క N-టెర్మినల్‌పై ఊహించిన N-ఎసిలేషన్‌తో పాటు LC-MS ద్వారా గుర్తించబడింది. N-ఎసిలేషన్ 0.1% ఫార్మిక్ యాసిడ్‌లో pH 7.2 మరియు 8.0 వద్ద అసంపూర్ణ జలవిశ్లేషణకు లోనవుతుంది, అయితే రెండు పరిస్థితులలో ఊహించని ఎసిలేషన్ హైడ్రోలైజ్ అయితే 0.1% ఫార్మిక్ యాసిడ్‌లో వాటి జలవిశ్లేషణ చాలా వేగంగా ఉంటుంది. Dithiothreitol చికిత్స ఊహించని ఎసిలేషన్ రెండింటి యొక్క జలవిశ్లేషణను ఎంపిక చేసి ఉత్ప్రేరకపరిచింది కానీ Ag-II యొక్క N-ఎసిలేషన్ కాదు. 94% pH 7.2 మరియు 96 వద్ద అధిక సల్ఫోNHS-బయోటిన్‌తో ప్రతిస్పందించినప్పుడు లైసిన్ యొక్క N-ఎసిలేషన్‌తో పోలిస్తే Ag- II టైరోసిన్ యొక్క O-ఎసిలేషన్ గరిష్ట దిగుబడి pH 7.2 వద్ద 99% మరియు pH 8.0 వద్ద 95%. pH 8.0 వద్ద %. Ag-II యొక్క మూడవ నిర్దేశించని సైట్ యొక్క ఎసిలేషన్ pH 7.2 వద్ద గరిష్టంగా 17% దిగుబడిని చూపించింది, అయితే 30 నిమిషాలలోపు pH 8.0 వద్ద అధిక దిగుబడి (≥ 47%). Ag-II టైరోసిన్ యొక్క ఊహించని O-ఎసిలేషన్ 1 నిమిషంలో pH 7.2 లేదా pH 8.0 వద్ద సంభవించింది, N-ఎసిలేషన్ వలె వేగంగా, ఇతర ఊహించని ఎసిలేషన్‌కు pH 8.0 వద్ద పూర్తి చేయడానికి ఎక్కువ సమయం అవసరం.