జర్నల్ ఆఫ్ మైక్రోబియల్ & బయోకెమికల్ టెక్నాలజీ

నైరూప్య

E. కోలిలో బయోలాజికల్ యాక్టివ్ రీకాంబినెంట్ హ్యూమన్ గ్రోత్ హార్మోన్ యొక్క అరబినోస్ ప్రమోటర్ ఆధారిత వ్యక్తీకరణ: ఓవర్ ఎక్స్‌ప్రెషన్ మరియు సింపుల్ ప్యూరిఫికేషన్ మెథడ్స్ కోసం వ్యూహాలు

సుధీర్‌బాబు శూరపనేని, అంజలి ఆప్టే-దేశ్‌పాండే, కేతకి సబ్నిస్-ప్రసాద్, జితేంద్ర కుమార్, వీణా ఎ రైకర్, ప్రకాష్ కొత్వాల్ మరియు శ్రీరామ్ పద్మనాభన్

రీకాంబినెంట్ హ్యూమన్ గ్రోత్ హార్మోన్ (rhGH) ఉత్పత్తి మరియు శుద్ధీకరణ కోసం E. కోలిలో అరబినోస్ ప్రమోటర్ ఆధారిత వ్యక్తీకరణ వ్యవస్థ రూపొందించబడింది మరియు అమలు చేయబడింది. షేక్ ఫ్లాస్క్ అధ్యయనాలు అసలైన pBAD24 వెక్టార్‌తో పోల్చితే సవరించిన pBAD24 వెక్టర్ (pBAD24M)లో వ్యక్తీకరించబడిన rhGH యొక్క గణనీయమైన మొత్తాలను సూచించాయి. బయోఇయాక్టర్‌లో pBAD24తో rhGH స్థాయిలు కేవలం 75 mg l ^-1 కి చేరుకోగా, సోడియం డోడెసిల్ సల్ఫేట్-పాలియాక్రిలమైడ్ జెల్ (SD ఎలెక్ట్రోఫోరెలమైడ్ జెల్) ద్వారా పరిష్కరించబడిన ప్రొటీన్‌ల డెన్సిటోమెట్రీ ద్వారా నిర్ణయించబడిన అదే విధమైన పరిస్థితులలో pBAD24M వెక్టర్‌తో ~1860 mg l ^-1 కి చేరుకుంది. PAGE). రెండు సాధారణ అయాన్-ఎక్స్ఛేంజ్ క్రోమాటోగ్రఫీ దశల ద్వారా యూరియా డీనాటరేషన్ తర్వాత rhGH ప్రోటీన్ విజయవంతంగా శుద్ధి చేయబడింది, ఇది శుద్ధి చేయబడిన hGH యొక్క ~750 mg l ^-1 మొత్తం 40% రికవరీతో శుద్ధి చేయబడిన rhGH యొక్క అత్యధిక దిగుబడిగా ఉంది. అటువంటి శుద్ధి చేయబడిన బాక్టీరియా ఉత్పన్నమైన rhGH N-టెర్మినల్ సీక్వెన్స్, CD స్పెక్ట్రా అధ్యయనాలు, మాస్ ఫింగర్‌ప్రింట్ విశ్లేషణ మరియు ఎజిలెంట్ 2100 బయోఅనలైజర్‌పై విశ్లేషణ ద్వారా వర్గీకరించబడింది. శుద్ధి చేయబడిన rhGH యొక్క బయోయాక్టివిటీని వాణిజ్యపరంగా లభించే hGH (సోమాటోట్రోపిన్)తో పోల్చవచ్చు.